Retrovirus-testen

Detectiemethoden

Methode Principes

Regelgevende focus

Cocultivatietest

Deze methode maakt gebruik van gevoelige indicatorcellen om infectieuze virusdeeltjes te vangen en bepaalt de besmettingsstatus door fenomenen zoals cytopathische effecten, focale vorming of specifieke antigeenexpressie te observeren. Het kan de aanwezigheid van infectieuze retrovirale deeltjes aantonen.

• Verplichte testdoelen: EOPC-cellen of productie-cellen met beperkte doorgang.

• Kerntestprocedure: er moet een twee-co-cultuursysteem- (virale amplificatiefase en activiteitsindicatorfase) worden gebruikt.

• Vereisten voor gevoelige cellen: Afhankelijk van de soort en de oorsprong van de cellen die worden getest, moeten verschillende of meerdere gevoelige cellijnen worden gebruikt voor testen op retrovirale infectiviteit.

• Vereisten voor kweekpassage: het co-kweeksysteem moet minimaal vijf keer (meestal vaker) worden gepasseerd om een ​​adequate amplificatie van het potentiële virus te garanderen.

Transmissie-elektronenmicroscopie

Deze methode maakt gebruik van transmissie-elektronenmicroscopie met hoge resolutie om de morfologie en structuur van virale deeltjes (zoals de typische icosahedrale envelopstructuur en nucleocapside-morfologie) direct te observeren, waardoor visuele identificatie en kwantitatieve analyse mogelijk zijn. Het kan bekende en onbekende virale deeltjes detecteren, inclusief niet-replicerende deeltjes of deeltjes die niet zijn opgevangen door infectiviteitstesten.

• Verplichte testdoelen: EOPC-cellen of productie-cellen met beperkte doorgang.

• Kernvereiste: Het type en de hoeveelheid retrovirale deeltjes moeten worden geïdentificeerd.

• Monstervereisten: Ultradunne coupes zijn vereist, waarvoor doorgaans systematische observatie van ten minste 200 cellen nodig is.

• Bijzondere bepalingen (Chinese Farmacopee 2025): Voor bepaalde knaagdiercellen (bijv. CHO, BHK-21) of insectencellen moet ook de hoeveelheid virusdeeltjes in de oogstvloeistof en hun infectiviteit worden bepaald.

Omgekeerde transcriptasetest

Gebaseerd op het kenmerk van reverse transcriptase dat de synthese van DNA uit een RNA-template katalyseert, kan de aanwezigheid van retrovirussen indirect worden bepaald door het detecteren van de radioactieve of fluorescente signalen van de reactieproducten om de enzymactiviteit te kwantificeren. Deze methode is onafhankelijk van de virale infectiviteit en kan in grote lijnen screenen op virale deeltjes met enzymatische activiteit.

• Uitleg van de vrijstelling: Zowel ICH Q5A(R2) als de Chinese Farmacopee (editie 2025) stellen duidelijk dat deze test niet vereist is voor cellen waarvan bekend is dat ze retrovirussen produceren (zoals bepaalde cellen van knaagdieren, insecten en vogels).

• Alternatieve vereisten: In geval van vrijstelling moet een uitgebreidere test op het type virusdeeltjes, de hoeveelheid en de infectiviteit worden uitgevoerd.

PCR of andere specifieke in vitro methoden

Op basis van de soortspecificiteit van cellen, wanneer de resultaten van de reverse transcriptase-activiteit onduidelijk zijn of niet kunnen worden gemeten, kunnen soort-specifieke retrovirusdetectiemethoden worden gebruikt, zoals retrovirus-PCR, immunofluorescentie, ELISA, enz. Kwantitatieve PCR van retrovirussen kan ook worden gebruikt voor de kwantificering van retrovirusdeeltjes.

• Primaire positionering: wordt doorgaans gebruikt als een belangrijke aanvulling op de hierboven genoemde kernmethoden en als hulpmiddel voor het bevestigen van de specificiteit.

• Toepassingsscenario's: vaak gebruikt voor zeer gevoelige detectie en kwantificering van specifieke bekende virussen (bijv. qPCR), of om bewijs op moleculair-niveau te leveren wanneer de resultaten van infectiviteit/elektronenmicroscopie twijfelachtig zijn.

• Regelgevende basis: De toepassing ervan vereist grondige validatie en moet voldoen aan de relevante richtlijnen voor de validatie van specifieke detectiemethoden in de doelmarkt (bijv. de Chinese Farmacopee (editie 2025)).

Professionele diensten

Uitgebreide bescherming voor u

Mondiale nalevingsaanpak

Onze testmethoden zijn diep geïntegreerd met de kernvereisten van ICH Q5A(R2), Chinese Pharmacopoeia (2025), USP en EP, en bieden een alles-in-één service voor het testen van infectieziekten, transmissie-elektronenmicroscopie (TEM) en detectie van reverse transcriptase-activiteit, waardoor gelijktijdige toepassing in meerdere regio's, waaronder China, de VS en Europa, op efficiënte wijze wordt ondersteund.

Breed-detectievermogen

We beschikken over een verscheidenheid aan gevoelige cellijnen en volwassen methoden voor verschillende risicoscenario's, die doelpathogenen, waaronder muriene retrovirussen, tropisme-retrovirussen en insectenretrovirussen, effectief kunnen detecteren, waardoor het brede spectrum en de specificiteit van de detectie worden gegarandeerd.

Eigen elektronenmicroscopieplatform

We beschikken over onze eigen transmissie-elektronenmicroscoop met hoge- resolutie en een senior professioneel technisch team om de kwaliteitscontrole- in een gesloten lus te realiseren gedurende het hele proces, van monstervoorbereiding tot gegevensuitvoer. We kunnen ook snelle kwantitatieve diensten voor grondstoffen (UPB) leveren om de downstream-verificatie van virusopruiming nauwkeurig te ondersteunen.

Uitgebreide methodevalidatie

Alle methoden worden uitgevoerd onder GMP/GLP-standaarden, waarbij strikt wordt voldaan aan de Chinese Farmacopee (editie 2025) en ICH Q2(R2) voor uitgebreide validatie van specificiteit, detectielimieten, enz. We bieden het volledige-cyclusprojectmanagement, van protocolontwerp tot applicatie-ondersteuning, waardoor naleving van gegevens en betrouwbaarheid worden gegarandeerd.

Bescherming van gegevensintegriteit

Van de monsterontvangst en de uitvoering van het experiment tot de uitgifte van rapporten, we hebben een compleet kwaliteitssysteem opgezet dat voldoet aan de GMP- en ALCOA+-principes. Door middel van professionele gegevensbeoordeling op meerdere-niveaus en een robuust mechanisme voor afwijkingscontrole (CAPA), garanderen we fundamenteel een hoge- kwaliteit en controleerbare oplevering voor elk project.